MILE米乐推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理的检测试剂盒，具备多项卓越特点。以下是本产品的优势：

一、产品特点

1. MILE米乐的检测试剂盒即开即用，用户仅需提供样品DNA模板。
2. 经过优化的引物等组分显示出很高的灵敏度。
3. 我们提供阳性对照，使得用户能够方便地区分假阴性样品。
4. 产品具备高特异性，引物设计基于高度保守的中间普雷沃菌DNA序列，有效避免与其它生物样本DNA的交叉反应。
5. 此检测试剂盒可用于定性和定量检测，定量检测的线性范围至少达到5个数量级。
6. 本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 此产品仅限于科研用途。

二、使用方法

1. DNA提取（样本制备区）

用户可自主选择方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

2. 稀释标准曲线样品（样本制备区）

为了避免污染，请在独立区域内完成以下操作：
1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2. 向每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL浓度为1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得到浓度为1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，冰上保存。
4. 依次在6号、5号管中进行稀释，直到得到6个不同浓度的标准曲线样品，冰上保存。如果不需要制作标准曲线，可以将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL。

3. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检样品的数量，准备N+2个qPCR管（N个样品+1个阴性对照+6个阳性对照），向PCR管中添加各项成分，请参阅详细说明书。

4. 添加模板（模板添加区）

向每个qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、和婴儿利什曼虫qPCR阳性对照。随后进行离心30秒，立即进入扩增反应。

5. 扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管置于PCR扩增仪的相应位置，进行扩增，具体扩增程序请参照详细说明书。

6. 结果分析

1. 如制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制曲线，再根据待测样品的Ct值推算出样品DNA浓度的log值。
2. 如未制作标准曲线，按以下标准判定结果：阳性对照的Ct值应小于30，显示出明确的指数增长并形成典型的S型曲线；阴性对照的Ct值为38或无Ct值，未显示出指数增长。样本检测结果判定为：Ct值小于35，表明样本中检出婴儿利什曼虫，为阳性；Ct值为38或无Ct值，表明样本中未检出婴儿利什曼虫，为阴性；若Ct值在35-38之间，需进行复检。

运输及保存

本产品需低温运输，储存于-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。