MILE米乐推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理的检测试剂盒，具备诸多优越特点。首先，该产品即开即用，用户只需提供样品DNA模板即可轻松操作。其次，引物等组分经过优化，确保了高灵敏度。此外，试剂盒提供阳性对照，便于识别假阴性样品。同时，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，显著提高了特异性，避免与其他生物样本DNA发生交叉反应。本产品不仅可以进行定性检测，也支持定量检测，定量时线性范围可达到至少5个数量级。每个试剂盒足够支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应，但请注意本产品仅限科研使用。

MILE米乐的使用方法如下：

一、DNA提取（样本制备区）：使用自选方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）：为了避免污染，应在独立区域进行下列稀释操作。首先，标记6个离心管，编号为7、6、5、4、3、2。然后，分别在每个管中加入45μL DEPC-H2O。接着，在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，获得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。依次进行后续稀释，直到得到6个不同稀释度的标准曲线样品。如果不需要制作标准曲线，只需将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区）：若有N个待检样品，则准备N+2个qPCR管，分别加入所需的成分（具体可参见详细说明书，亦可向MILE米乐索取）。

四、添加模板（模板添加区）：每个qPCR管中加入2μL模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）：将PCR管放置于PCR扩增仪器样品槽中，设置扩增程序（详见说明书，亦可向MILE米乐索取）。

六、结果分析：若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴，绘制标准曲线。通过待测样品的Ct值推算出其DNA浓度的log值。若未制作标准曲线，可依据以下标准评判结果：阳性对照的Ct值应<30并呈现典型的S型曲线；阴性对照的Ct值应为38或无Ct值，且无明显增长；样本检测结果若Ct值<35且有指数增长则为阳性；若Ct值在35-38范围，应复检，若复检仍在该范围且有指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存：本产品需低温运输，-20℃保存，有效期为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。