MILE米乐的多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）是通过对一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，从而刺激机体产生多种B细胞克隆，形成针对不同抗原表位的抗体的混合物。这些抗体构成了我们所称的多克隆抗体。而单克隆抗体则是由单一B细胞克隆产生的，具有高度均一性且仅针对特定抗原表位的抗体，通常是通过杂交瘤技术制备的。这一过程是将分泌特异性抗体的致敏B细胞与具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤。

一、单抗与多抗的优缺点

多克隆抗体的优点

1. 有助于放大低表达水平靶蛋白的信号；

2. 能识别多个表位；

3. 相较单克隆抗体，能够容忍抗原的微小变化；

4. 可识别与免疫原蛋白质高同源性的蛋白，或者从非免疫原物种组织样品中筛选靶蛋白；

5. 通常用于检测变性蛋白质的首选；

6. 多表位的识别通常提供更强的检测能力。

多克隆抗体的缺点

1. 易产生批次间差异；

2. 可能会产生大量非特异性抗体，在某些应用中可能造成背景信号；

3. 不适用于探测抗原的特定结构域，因抗血清通常可以识别多个结构域。

单克隆抗体的优点

1. 杂交瘤制备后，成为恒定的再生源，所有批次相同；

2. 切片和细胞染色时背景较低；

3. 具有特异性，适合分析测定中的一抗或检测组织中的抗原，背景染色显著低；

4. 同质性极高；

5. 高特异性允许其高效结合混合物中的抗原。

单克隆抗体的缺点

1. 虽可产生大量特异性抗体，但可能特异性过强；

2. 在抗原化学处理后，比多克隆抗体更容易丢失表位，这可通过使用同一抗原的不同单克隆抗体进行补偿。

二、选择单抗或多抗的依据

若对抗体的特异性要求高，且需要较大用量或长期保持一致，适合制备单克隆抗体，例如在WB/IP/IF/ICC等应用中，MILE米乐建议选择单克隆抗体。多克隆抗体特异性较差，即使使用相同的抗原，批次间差异依然明显，因此在特异性和一致性方面存在局限。此外，使用多抗进行免疫检测时，易导致背景问题，如WB中的杂带或IHC中的深色背景。尽管存在交叉反应的问题，但由于多抗可识别多个抗原表位，即使有少数表位被破坏或抗原构象发生变化，实验结果依然受益。同时，多抗对免疫原的量需求较大，若免疫原制备困难，建议选择单抗。

若对抗体特异性要求不高，且进行沉淀和凝集反应的检测性实验或仅需ELISA检测，可以选择制备多克隆抗体。

三、抗原的选择

抗原的选择包括天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白和多肽。抗原质量越高，最终获得高质量抗体的几率也就越大！目前，抗体制备常采用重组蛋白或多肽作为抗原。常规情况下，重组蛋白作为抗原往往包含更多的抗原决定簇，既包括空间表位，也有线形序列表位，对机体的免疫刺激较为充分，因此获取应用广泛的抗体的概率较高，尤其是当目的蛋白具有修饰或复杂结构时，通常会优先选择重组蛋白。

当然，在某些情况下，可能需要用多肽进行制备，例如，对同源家族中特定蛋白的抗体制备，需找到特异性氨基酸合成多肽，或对于一些修饰型抗体，则需要在多肽合成阶段对某些氨基酸进行定点修饰。

抗原多肽的选择一般遵循以下基本原则：
1. 尽量位于蛋白表面；
2. 保证该段序列不形成α-helix；
3. N端、C端的肽段优于中间的肽段；
4. 避免蛋白内部重复或接近重复段的序列；
5. 避免同源性过强的肽段；
6. 交联可在N、C两端进行，选择依据是交联位置对产生抗体的重要性；
7. 序列中应避免过多的脯氨酸，但一两个脯氨酸有助于肽链结构稳定，有利于产生特异性抗体。