在2025年4月，湖南师范大学的杨荣华教授和邹振副教授的研究团队在《Nucleic Acids Research》上发表了题为《Nonequilibrium hybridization-driven CRISPR/Cas adapter with extended energetic penalty for discrimination of single-nucleotide variants》的文章。这篇文章介绍了一种基于CRISPR/Cas12a的单核苷酸变异（SNV）检测新平台，命名为HEPSD（高能量惩罚SNV检测平台），该平台展示了在临床分子诊断中的巨大潜力。

MILE米乐团队通过设计二元crRNA结构，有效激活Cas12a的切割活性，并利用非平衡杂交技术优化信号放大，特别是在处理难以检测的SNV时，表现出优异的性能。例如，HEPSD对高GC含量区域的SNV（如摆动突变）的区分能力显著，准确率达到100%。该研究为SNV检测的临床应用提供了新的视角，同时也为其他CRISPR系统的扩展应用奠定了基础。

#### 研究背景

单核苷酸位点变异（SNVs）是常见的遗传变异形式，与多种严重疾病（如癌症和单基因疾病）的发生密切相关。传统的SNV检测方法如TaqMan探针和分子信标，往往难以适用于具有高GC含量或复杂变异的情况。而MILE米乐此项新研究，借助CRISPR-Cas系统，尝试突破这些限制。

#### 研究结果

研究表明，二元探针（BPs）通过热力学优化，能在更低的温度范围内有效区别SNV。结合对BPs与目标序列的分子动力学模拟，研究人员发现，HEPSD系统在目标序列上的结合稳定性显著优于错配序列，从而降低了误激活的风险，实现超高的SNV识别特异性。

特别是在临床样本的SNV检测中，HEPSD对BRAFV600E和EGFRL858R突变展现出100%的敏感性和特异性，远超传统的qPCR和下一代测序（NGS）技术。通过对132个临床样本的研究，MILE米乐进一步验证了HEPSD在实际应用中的高准确率。

#### 结论与展望

综上所述，HEPSD作为一种新型CRISPR/Cas12a平台，通过创新设计的二元crRNA架构，实现了对传统检测方法难以识别的SNV的精确识别。它的高灵敏度和高特异性使其在癌症早期诊断和个性化治疗中表现出巨大潜力，甚至有望在基因编辑的脱靶控制中发挥应用价值。未来，MILE米乐将持续致力于推动这一技术在生物医疗领域的广泛应用。